تکثیر هم دمای متصل به حلقه یا تکثیر ایزوترمال متصل به حلقه ( به انگلیسی: ( LAMP ) ( Loop - mediated isothermal amplification ) ، تکنیک تک لوله ای برای تکثیر DNA است. [ ۱] [ ۲] از این روش ممکن است در آینده به عنوان یک جایگزین کم هزینه برای تشخیص بیماری های خاص استفاده شود. همچنین این تکنیک ممکن است با رونویسی معکوس برای شناسایی RNA نیز ترکیب شود.
LAMP یک روش تکثیرکننده اسید نوکلئیک به صورت ایزوترمال است. برخلاف واکنش زنجیره ای پلیمراز ( PCR ) که به صورت مرحله ای و با تغییرات متناوب دما انجام می گیرد، تکثیر ایزوترمال در دمای ثابت انجام می شود و نیازی به ترموسایکلر نیست.
در روش LAMP، توالی هدف در دمای ثابت ۶۰–۶۵ درجه سانتی گراد با استفاده از دو یا سه مجموعه پرایمر ( آغازگر ) و یک آنزیم پلیمراز که علاوه بر فعالیت رونویسی، فعالیت جابجایی رشته بالایی نیز دارد، تکثیر می شود. به طور معمول، ۴ آغازگر متفاوت برای شناسایی ۶ ناحیه متمایز در ژن هدف مورد استفاده قرار می گیرد، که به شدت به اختصاصیت روش می افزاید. یک جفت «آغازگر حلقه ای» اضافی نیز می تواند واکنش را بیشتر تسریع کند. [ ۳] با توجه به ماهیت خاص عملکرد این آغازگرها، مقدار DNA تولید شده در روش LAMP به طور قابل توجهی بالاتر از روش PCR است.
در این روش مقدار زیادی رسوب منیزیم پیروفسفات به عنوان محصول جانبی در محلول تولید و سبب ایجاد کدورت می شود. به همین دلیل برای شناسایی محصول تکثیر شده واکنش از روش فتومتری استفاده می شود. [ ۴] فتومتری باعث آسان تر شدن تجسم با چشم غیر مسلح به ویژه در واکنش های با حجم بالا می شود. این واکنش می تواند به صورت real time یا در لحظه با اندازه گیری کدورت[ ۵] یا با روش فلورسانس ( با استفاده از رنگ های intercalating مثل SYTO9 ) نیز انجام شود. [ ۶] رنگ هایی مثلSYBR green می توانند برای ایجاد تغییر رنگی که با چشم غیرمسلح قابل مشاهده است و نیازی به تجهیزات گران قیمت ندارد، یا برای ایجاد پاسخی که با دقت بیشتری توسط تجهیزات اندازه گیری می شود، مورد استفاده قرار گیرند. مولکول های رنگ، DNA را جاگذاری یا به طور مستقیم برچسب گذاری می کنند و به نوبه خود می توانند با تعداد نسخه هایی که از ابتدا حضور دارند، همبستگی داشته باشند. از این رو روش LAMP می تواند کمی هم باشد. تشخیص درون لوله ای تکثیر DNA با استفاده از کلسین بارگذاری شده با منگنز ممکن می شود. طی واکنش سنتزDNA به صورتin vitro، کلسین واکنش فلورسانس را با ترکیب منگنز با پیروفسفات آغاز می کند. [ ۷] علاوه بر این تشخیص آمپلیکون های LAMP با چشم غیرمسلح به توانایی آن ها در ترکیب با ss - DNA متصل به طلا و در نتیجه جلوگیری از تغییر رنگ قرمز طبیعی به بنفش آبی بستگی دارد که در غیر این صورت با تجمع ناشی از نمک ذرات طلا صورت می گیرد؛ بنابراین روشLAMP ترکیب شده با شناسایی آمپلیکون ها به وسیله AuNP مزایای بیشتری نسبت به روش های قبلی دارد. این مزایا عبارتند از:کاهش زمان تست، تثبیت آمپلیکون با هیبریداسیون و تجهیزات ساده تر ( مثل عدم نیاز به ترموسایکلر، تجهیزات الکتروفورز و لامپ اشعه ماورای بنفش ) [ ۸]
این نوشته برگرفته از سایت ویکی پدیا می باشد، اگر نادرست یا توهین آمیز است، لطفا گزارش دهید: گزارش تخلفLAMP یک روش تکثیرکننده اسید نوکلئیک به صورت ایزوترمال است. برخلاف واکنش زنجیره ای پلیمراز ( PCR ) که به صورت مرحله ای و با تغییرات متناوب دما انجام می گیرد، تکثیر ایزوترمال در دمای ثابت انجام می شود و نیازی به ترموسایکلر نیست.
در روش LAMP، توالی هدف در دمای ثابت ۶۰–۶۵ درجه سانتی گراد با استفاده از دو یا سه مجموعه پرایمر ( آغازگر ) و یک آنزیم پلیمراز که علاوه بر فعالیت رونویسی، فعالیت جابجایی رشته بالایی نیز دارد، تکثیر می شود. به طور معمول، ۴ آغازگر متفاوت برای شناسایی ۶ ناحیه متمایز در ژن هدف مورد استفاده قرار می گیرد، که به شدت به اختصاصیت روش می افزاید. یک جفت «آغازگر حلقه ای» اضافی نیز می تواند واکنش را بیشتر تسریع کند. [ ۳] با توجه به ماهیت خاص عملکرد این آغازگرها، مقدار DNA تولید شده در روش LAMP به طور قابل توجهی بالاتر از روش PCR است.
در این روش مقدار زیادی رسوب منیزیم پیروفسفات به عنوان محصول جانبی در محلول تولید و سبب ایجاد کدورت می شود. به همین دلیل برای شناسایی محصول تکثیر شده واکنش از روش فتومتری استفاده می شود. [ ۴] فتومتری باعث آسان تر شدن تجسم با چشم غیر مسلح به ویژه در واکنش های با حجم بالا می شود. این واکنش می تواند به صورت real time یا در لحظه با اندازه گیری کدورت[ ۵] یا با روش فلورسانس ( با استفاده از رنگ های intercalating مثل SYTO9 ) نیز انجام شود. [ ۶] رنگ هایی مثلSYBR green می توانند برای ایجاد تغییر رنگی که با چشم غیرمسلح قابل مشاهده است و نیازی به تجهیزات گران قیمت ندارد، یا برای ایجاد پاسخی که با دقت بیشتری توسط تجهیزات اندازه گیری می شود، مورد استفاده قرار گیرند. مولکول های رنگ، DNA را جاگذاری یا به طور مستقیم برچسب گذاری می کنند و به نوبه خود می توانند با تعداد نسخه هایی که از ابتدا حضور دارند، همبستگی داشته باشند. از این رو روش LAMP می تواند کمی هم باشد. تشخیص درون لوله ای تکثیر DNA با استفاده از کلسین بارگذاری شده با منگنز ممکن می شود. طی واکنش سنتزDNA به صورتin vitro، کلسین واکنش فلورسانس را با ترکیب منگنز با پیروفسفات آغاز می کند. [ ۷] علاوه بر این تشخیص آمپلیکون های LAMP با چشم غیرمسلح به توانایی آن ها در ترکیب با ss - DNA متصل به طلا و در نتیجه جلوگیری از تغییر رنگ قرمز طبیعی به بنفش آبی بستگی دارد که در غیر این صورت با تجمع ناشی از نمک ذرات طلا صورت می گیرد؛ بنابراین روشLAMP ترکیب شده با شناسایی آمپلیکون ها به وسیله AuNP مزایای بیشتری نسبت به روش های قبلی دارد. این مزایا عبارتند از:کاهش زمان تست، تثبیت آمپلیکون با هیبریداسیون و تجهیزات ساده تر ( مثل عدم نیاز به ترموسایکلر، تجهیزات الکتروفورز و لامپ اشعه ماورای بنفش ) [ ۸]
