استخراج اران ای

استخراج آران ای. استخراج آران ای فرآیندی است که طی آن آران ای ( RNA ) کل موجود در یک نمونه هموژنیزه شده سلولی جدا و تصفیه می شود. این روش آزمایشگاهی در بیوتکنولوژی، مهندسی ژنتیک و. . . کاربرد ویژه ای دارد و یکی از پیشنیازهای ضروری در فرآیندهایی همچون واکنش زنجیره ای پلیمراز ( PCR ) و RT - PCR ، نورترن بلاتینگ و دیگر روشها می باشد. [ ۱] [ ۲]
روش های مختلفی برای استخراج آران ای وجود دارد که از میان آنها به روش زیر که طی هفت مرحله انجام می شود اشاره می گردد.
نخستین مرحله از استخراج آران ای است که طی آن بافت مرود نظر از میان مجموعه بافتی بدن جدا می شود که برای این منظور می توان از پروتئازها استفاده نمود. گاهی نیز در محیط آزمایشگاه بافت های آماده در ته فلاسک وجود دارند که برای جدا کردن آنها از تریپسین و EDTA استفاده می شود.
در دومین گام باید آران ای و دیگر اجزای سلولی را از محاصره غشایی خارج نموده که بدین منظور باید مجموعه سلولی را تخریب کرده و ترکیبی همگن بدست آورد. RNX - Plus یا Trizol در این مرحله مورد استفاده قرار می گیرند.
در این مرحله آران ای را از DNA و پروتئین های سلولی جدا می نمایند. پس از اضافه نمودن کلروفرم به نمونه آنرا تحت شرایط ویژه ای سانتریفیوژ کرده که در پایان سه فاز تفکیک شده را حاصل می نماید. فاز زیرین مربوط به پروتئین ها، فاز میانی مربوط به DNA و فاز رویین مربوط به RNA می باشد.
در این مرحله پس از انتقال فاز رویین به لوله ای دیگر با استفاده ایزوپروپانول و سپس سانترفیوژ آران ای را رسوب می دهیم.
ششتشوی رسوب آران ای با استفاده از اتانول ۷۵٪ گام پنجم را تشکیل می دهد. نکته: در استخراج DNA شستشو با الکل ۷۰٪ انجام می شود ولی در استخراج آران ای با الکل ۷۵٪
انحلال رسوب آران ای با استفاده از DEPC treated Water ششمین گام از استخراج آران ای می باشد
آخرین گام سنجش صحت استخراج آران ای می باشد که از دو طریق اسپکتروسکوپی یا الکتروفورز کمیت یا کیفیت کار مورد ارزیابی قرار می گیرد.
↑ Peirson SN, Butler JN ( 2007 ) . "RNA extraction from mammalian tissues". Methods Mol. Biol. . Methods in Molecular ↑ «نسخه آرشیو شده». بایگانی شده از اصلی در ۱۶ فوریه ۲۰۱۳. دریافت شده در ۲۲ ژانویه ۲۰۱۳.
• تکنیک های ژن شناسی
• روش های بیوشیمی
• ژنتیک مولکولی